文章詳情

國產細胞培養基常見問題及解決方法(一)

日期:2022-05-21 02:36
瀏覽次數:417
摘要: 國產細胞培養基常見問題及解決方法(一) 1.血清中可能出現的沉澱物是什麽? 基於多年的實驗研究,用於細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉澱物: (1)磷酸鈣,它也是常見的一種沉澱物,通常會使血清出現渾濁,並且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉澱物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由於布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物汙染。 (2)纖維蛋白,它是經常出現的較大的沉澱物,可以達到 1-2mm,可以用肉眼觀察到。 因為血清都是在低溫下進行...

國產細胞培養基常見問題及解決方法(一)

1.血清中可能出現的沉澱物是什麽?

 基於多年的實驗研究,用於細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉澱物:

(1)磷酸鈣,它也是常見的一種沉澱物,通常會使血清出現渾濁,並且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉澱物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由於布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認為是微生物汙染。

(2)纖維蛋白,它是經常出現的較大的沉澱物,可以達到 1-2mm,可以用肉眼觀察到。 因為血清都是在低溫下進行收集和快速處理的,一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白 的前體)在處理過程中仍然處於溶解狀態,當經過 後的過濾分裝後,就會在瓶中凝結出現纖 維蛋白沉澱。

(3)膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。也是血清中出現沉澱物的常見原因。


2.血清中的沉澱物對細胞培養有什麽影響?

(1)細胞生長。凯时kb88的試驗以及經驗表明沉澱物不會影響細胞培養,凯时kb88的客戶以及其它血 清生產商也證明了這一點。

(2)過濾。如果血清中出現大量的沉澱物,血清將很難過濾。一般說來,因為在血清生產時已經經過 100nm 或者 40nm 的過濾處理,並且經過了嚴格的無菌檢測,因此不推薦再過濾用於細胞培養的血清。

(3)汙染。磷酸鈣往往被誤認為微生物汙染而引起爭端,研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉澱,因此就會比較警覺的去做無菌試驗,將血清放在培養箱中培養幾天,結果可能會觀察到更多的絮狀沉澱,可能就斷定血清被汙染了。建議不要直接將血清放在培養箱中培養觀察是否有菌,而是將血清加到瓊脂板上進行培養以觀察是否有細菌生長。另外,也可以進行革蘭氏染色,在油鏡下觀察,以確認是否有汙染。


3.如何避免血清中沉澱物的出現?

 首先要注意正確的血清解凍步驟,而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。凯时kb88已經發現在下列情況下沉澱物可能增加,使用中應該盡量避免:

(1)熱滅 清;

(2)在 37℃下培養血清;

(3)γ射線照射;

(4)反複凍融;

(5)在室溫下放置時間過長

(6)長期儲存在 2-8℃;


4.如何去除血清中的沉澱?

 如想去除這些絮狀沉澱物,可以將血清分裝到無菌離心管中,以 400g 離心,上清液即可直接加入到培養基內一起過濾。

注意:不要以過濾的方式去除這些絮狀沉澱物,因為這可能阻塞濾膜。